蛋白纯化服务
蛋白纯化技术是生物研究领域的一项重要技术。要研究某一个特殊蛋白质,首先就要将这个蛋白从生物体中分离纯化出来。蛋白纯化方法主要是利用不同蛋白质间的相似性与差异。依据蛋白间的相似性可以去除非蛋白物质,再根据蛋白质的差异性将目的蛋白分离出来。
蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如RNA、DNA等分开,常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来,常用的方法有:凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析
凝胶过滤(也叫排阻层析或分子筛)是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。不同蛋白的形状及分子大小存在差异,扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异,大的蛋白分子会被先洗脱出来,分子越小,越晚洗脱,从而达到分离蛋白的目的。一般来说,凝胶过滤层析柱越细、越长纯化的效果越好。
离子交换层析
离子交换层析是一种依据蛋白表面所带电荷量不同进行蛋白分离纯化的技术。带电荷的氨基酸残基,在一定条件下可以与阳离子交换柱或阴离子交换柱进行可逆性结合,用改变PH或逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时,带电荷不同的物质被依次洗脱出来,从而达到分离的效果。
亲和层析
亲和层析纯化是利用生物大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性进行蛋白纯化的技术。可以利用配基与分子生物间的特异性吸附来分离蛋白,也可以在蛋白上加入标签,利用标签与配基之间的特异性结合来纯化蛋白。
疏水作用层析
疏水作用层析是利用盐-水体系中样品分子的疏水基团和层析介质的疏水配基之间疏水力的不同而进行分离的一种层析方法。可以依次用从高至低离子强度洗脱液将疏水用作由弱至强的组分分离。